Методические указания для курса «Санитарная микробиология»

Методические указания к лабораторному практикуму «Санитарно-микробиологический контроль на производстве», 

 Составители: Инешина Е.Г., Гомбоева С. В.

 Цель данных методических указаний- способствовать развитию и совершенствованию практических навыков у студентов при проведении санитрано-микробиологической оценки объектов (воздух, вода, почва, оборудование, руки и т.п). При этом предполагается, что МУ будут служить дополнительным материалом при рассмотрении теоретических вопросов по дисциплинам «Санитарная микробиология», «Санитарно-микробиологический контроль на предприятиях».
 МУ состоят из основной части и приложений. В основной части рассматриваются общепринятые методы санитарно-микробиологического контроля воздуха, воды, почвы, оборудования, дающие полное представление о возможностях контроля данных объектов с точки зрения их безопасности для здоровья населения. Предлагаются задания для выполнения лабораторных работ, закрепляющие методический материал и позволяющие приобрести навыки по санитарно-микробиологической оценке объектов внешней среды. Для контроля усвоения каждой темы предлагаются вопросы для самопроверки.

В приложениях представлены справочные таблицы для санитарно- микробиологической оценки исследуемых объектов (№1), названия и состав питательных сред для выделения и обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов (№2), основные характеристики разных групп микроорганизмов, тесты для проведения идентификации чистых культур микроорганизмов (№3).

Ключевые слова: микроорганизмы, кишечная палочка, методы выделения, анализ воды и почвы.

Исходный уровень знаний

1.      Экология микроорганизмов, их систематика.

2.       Методы выделения микроорганизмов из объектов окру­жающей среды: техника посева, культивирования мик­роорганизмов, оценки полученных результатов.

3.       Методы изучения морфологических и биохимических свойств микроорганизмов.

4.       Физиологические свойства микроорганизмов (влияние внешних факторов, питательные среды).

5.      Патогенные микроорганизмы, факторы патогенности.

Литература для самоподготовки

1.      Богданов В.М. и др. Техническая микробиология пищевых продуктов/ В.М. Богданов, Р.С. Баширова, К.А. Кирова и др. - М.: Пищ.пр-сть, 1968. - 743 с.

2.       Мудрецова-Висс К.А., Кудряшова А.А., Дедюхина В.П. Микробиология, санитария и гигиена: учеб.для вузов. 7-е изд. - М.: ИД «Деловая литература», 2001. - 388 с.

3.       Санитарная микробиология / Н.В.Билетова, Р.П.Корнелаева, Л.Г.Кострикина и др./ Под ред. С.Я.Любашенко. - М.: Пищ.пр-сть, 1980. - 352 с.

4.       Мармузова Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. - М.: ИРПО, Академия, 2000. - 132 с.

Требования к микробиологическим лабораториям

Лабораторные занятия по курсу «Санитарная микробиология», ряду курсов по выбору микробиологического направления проводятся в учебной лаборатории, предназначенной для подготовки и проведения различных микробиологических исследований. Оборудование и техника проведения работ в учебной лаборатории должны соответствовать                требованиям, предъявляемым к

производственным и другим лабораториям соответствующего профиля.

В состав учебной лаборатории входят: комната для исследований; автоклавная (стерилизационная); моечная, оборудованная для мытья посуды; препараторская, где проводят подготовку лабораторной посуды и хранят питательные среды; материальная комната - для хранения запасов реактивов, посуды, аппаратуры, приборов, хозяйственного инвентаря. Для проведения посевов, стерильной разливки сред и других работ с соблюдением правил асептики в помещении для исследований устраивают застекленный бокс с предбоксником.

За каждым студентом в лаборатории закрепляют отдельное рабочее место, на котором размещают микроскоп, иммерсионное масло. На столике для окраски размещают штатив с бактериологической петлей и стерильной водой; горелку спиртовую; набор красящих растворов и реактивов для окрашивания препаратов микроорганизмов; предметные и покровные стекла; сливную чашку с мостиком для окраски мазков; промывалку с водопроводной водой и сосуд с дезинфицирующим раствором; вату и фланелевые салфетки; карандаши по стеклу; часы; спички и пр.

Рабочие столы должны быть всегда чистыми, а используемые для работы предметы - аккуратно разложены или расставлены по местам.

Правила работы, поведения и техника безопасности в микробиологической лаборатории

При работе в учебных лабораториях необходимо учитывать то, что объектом исследования являются микроорганизмы, которые при неумелом обращении с ними могут вызвать болезни у человека. В связи с этим материалы и культуры микроорганизмов, используемые для учебных занятий, должны рассматриваться как потенциально опасные. Поэтому работающие в лабораториях сотрудники и студенты обязаны знать и соблюдать правила, обеспечивающие предотвращение обсеменения объектов внешней среды микроорганизмами и личную безопасность работающего. На занятиях необходимо соблюдать следующие требования:

работать в лаборатории разрешается только в специальной одежде - халате, шапочке или косынке. Причем халат должен быть застегнут на все пуговицы, а волосы убраны под головной убор. Выходить за пределы лаборатории в спецодежде, выносить из лаборатории пробирки с культурами, препараты (мазки) и другие предметы категорически запрещается. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи. Книги, портфели и другие необходимые для занятия предметы складывают на отдельный, специально отведенный для этих целей стол;

в лаборатории запрещается курить, принимать пищу и воду;

студенты приступают к работе только с разрешения преподавателя и всю работу проводят в строгом соответствии с изучаемой тематикой;

использованные пипетки, предметные и покровные стекла, шпатели, ватные тампоны и прочее помещают в сосуды с дезинфицирующей жидкостью (1%-ный раствор хлорамина и др.). Пинцеты, бактериологические петли, препаровальные иглы и другие мелкие металлические предметы после соприкосновения с культурой стерилизуют путем прокаливания в пламени горелки и только после этого помещают в штатив или банку. Категорически запрещается оставлять указанные предметы нестерилизованными и разбросанными по столу;

отработанные культуры микроорганизмов, а также другие загрязненные материалы и предметы по указанию лаборанта складывают на специально отведенный для этих целей стол или в специальные бюксы и затем стерилизуют в автоклавах;

в случаях, когда культура микроорганизмов попадает на стол и другие предметы, необходимо при помощи ватного тампона, смоченного дезраствором, собрать ее, а загрязненное место тщательно обработать дезинфи-цирующим раствором. При попадании загрязненного культурой материала на кожу, коньюнктиву или в рот принимают экстренные меры. О происшествии необходимо сообщить ведущему преподавателю или лаборанту;

студенты не должны включать электроприборы и аппаратуру без контроля преподавателя или лаборанта. Нельзя касаться металлическими и другими предметами проводов и контактных частей электросети.

каждый студент обязан соблюдать опрятность в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование;

 по окончании занятия студенты сдают бактериальные культуры и все материалы преподавателю, под контролем убирают рабочие места, после чего дежурный сдает аудиторию лаборанту;

перед уходом из лаборатории студенты снимают халаты, руки обрабатывают дезинфицирующим раствором и тщательно их моют.

С настоящими правилами студенты знакомятся на первом занятии, о чем каждый из них расписывается в специальном журнале по технике безопасности.

Предмет и задачи санитарной микробиологии

Санитарная микробиология - наука, изучающая микрофлору окружающей среды (в том числе патогенные бактерии и вирусы), ее жизнедеятельность и вызываемые в результате этого процессы, которые могут непосредственно или косвенно оказывать неблагоприятное влияние на окружающую среду и здоровье людей.

Началом развития санитарной микробиологии как науки принято считать 1888 г., когда впервые французский врач Е. Масе предложил учитывать наличие кишечной палочки в качестве показателя фекального загрязнения воды. Как наука, санитарная микробиология базируется на основных положениях микробиологии, гигиены и эпидемиологии, постоянно разрабатывая методы контроля за санитарным состоянием воды, почвы, пищевых продуктов и предметов быта.

Результаты исследований в области санитарной микробиологии используются в первую очередь в профилактической и лечебной медицине, а также практически во всех отраслях народного хозяйства. В связи с этим перед санитарной микробиологией стоят следующие задачи:

         разработка,             совершенствование             методов исследования объектов окружающей среды - воды, воздуха, почвы, пищевых продуктов, предметов быта и т.д. При этом используются последние достижения естественных наук;

          оценка путей воздействия человека и животных на окружающую среду. В результате общественной и индивидуальной деятельности людей происходит контаминация объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, при этом особое внимание уделяется изучению нарушений процессов самоочищения воды, почвы. Знание законов развития живой материи биосферы позволяет оценивать возможности самоочищения объектов окружающей среды (почвы, воды), создавать методы активного вмешательства человека в процессы, происходящие в природе, в целях ее сохранения и оздоровления;

           разработка нормативных документов, определяющих соответствие микрофлоры объектов окружающей среды гигиеническим требованиям, в том числе характеристику по микробиологическим показателям;

         разработка рекомендаций и мероприятий по оздоровлению объектов окружающей среды, контроль за их выполнением.

          охрана окружающей среды. Эта задача является одной из главных, т.к. на основе закономерностей взаимодействия человека с факторами окружающей среды, разрабатываются научно обоснованные рекомендации по сохранению здоровья человека.

Общие понятия санитарной микробиологии

Патогенность - способность микроорганизмов вызывать заболевание. Этот принцип является свойством вида. Например, Corynebacterium diphtheriae (микроорганизмы, вызывающие заболевание дифтерией) считаются патогенными для человека, однако отдельные штаммы этого вида могут сильно различаться по степени патогенности (вирулентности). Следовательно, вирулентность - признак штамма, а не вида. Поэтому можно говорить о высоко-, низко- и даже авирулентном штамме определенного вида. Вирулентность микроорганизмов определяется двумя факторами: инвазивностью, т.е. способностью размножаться в организме хозяина, и токсигенностью, т.е. способностью образовывать токсины - вещества, повреждающие органы (ткани) хозяина. Некоторые виды патогенных микроорганизмов повреждают макроорганизм при помощи косвенного механизма, вступающего в действие при условии предварительного контакта с тем же возбудителем. Это явление называется повышенной чувствительностью, или аллергией. В этом случае участвует иммунная реакция чувствительного хозяина на компонент клетки паразита.

Токсигенностъ. Впервые это явление наблюдали исследователи в конце XIX века, работая с микроорганизмами Clostridium tetani (возбудитель столбняка) и Corynebacterium diphtheriae. Фильтраты, освобожденные от клеток микроорганизмов, вводили опытным животным. При вскрытии погибших животных обнаруживались симптомы, характерные для соответствующей инфекционной болезни. Как выяснилось позже, не все бесклеточные фильтраты патогенных микроорганизмов были токсичными, это позволило предполагать экзогенную и эндогенную природу бактериальных токсинов.

Исследование структуры токсинов и их локализации стало возможным лишь с развитием химической и биологической наук. Однако даже в настоящее время эти исследования часто бывают затруднены вследствие различия условий и конечных результатов культивирования клеток in vivo и in vitro, а также ввиду сложности подбора системы для культивирования возбудителя той или иной болезни. К примеру, токсичные вещества возбудителей сибирской язвы (Bacillus anthracis) и чумы (Yersinia pestis) - это комплексы двух или более веществ, которые не обладают токсическим действием как в изолированном состоянии, так и вне организма-хозяина. Например, токсин возбудителя холеры (Vibrio cholerae) был обнаружен только при введении фильтратов культуры в изолированную петлю кишечника кролика.

Как правило, экзотоксины - вещества белковой природы, а эндотоксины - комплексы липополисахаридов с белками, находящимися в наружных слоях клеточных стенок (для Грам (-) микроорганизмов).

Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду с выделениями больных людей и животных, носителей соответствующих инфекций, а также с трупами погибших от инфекционных заболеваний. Патогенные микроорганизмы могут передаваться от одного хозяина другому, этот процесс называется инфекциейi а при возникновении патологического процесса - инфекционным заболеванием.

Болезнетворные микроорганизмы проникают в организм хозяина различными путями:

    с пищей или водой;

    с взвешенными в воздухе частицами пыли или влаги;

    путем прямого контакта с больным (носителем инфекции);

    через укус любого носителя инфекции;

    в результате попадания на поврежденные участки кожи.

Непосредственное             обнаружение            возбудителей

инфекционных болезней в объектах окружающей среды (несмотря на то, что в настоящее время разработаны методы прямого, ускоренного и количественного их определения) имеет целый ряд трудностей. К ним относятся следующие:

-    патогенные микроорганизмы находятся в окружающей среде непостоянно - сравнительно легко их можно обнаружить в период эпидемии той или иной инфекции, но очень трудно - в межэпидемические периоды. Основная же деятельность санитарных микробиологов направлена на предупреждение возникновения эпидемий и поэтому вся работа ведется в межэпидемические периоды;

-     концентрация патогенных микроорганизмов в окружающей среде значительно уступает непатогенным и распространение их в объектах неравномерно;

-      при выделении патогенных микроорганизмов методами культивирования на питательные среды, даже ингибиторные, они неизбежно страдают от конкуренции сапрофитной флоры.

В связи с вышеизложенным очевидно, что получаемые отрицательные результаты прямого определения патогенных микроорганизмов в объектах окружающей среды еще не говорят с достоверностью об их отсутствии.

В качестве косвенных показателей загрязнения объектов окружающей среды используют показатели их общей обсемененности (КМАФАнМ - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) и наличие в них микроорганизмов-комменсалов (сапрофитных микроорганизмов) млекопитающих. Микроорганизмы- сапрофиты постоянно обитают в кишечнике или в верхнем отделе дыхательных путей человека и животных, многие из них относятся к условно-патогенной микрофлоре, т.е. могут проявлять свои патогенные свойства только при определенных условиях. Такие микроорганизмы называются санитарно- показателъными.

Основные требования, предъявляемые к санитарно- показательным микроорганизмам, следующие:

1)        постоянное обитание в естественных полостях организма человека и животных (которые являются их единственной природной средой обитания - биотопом) и выделение их в большом количестве в окружающую среду;

2)        продолжительность выживания их в окружающей среде должна быть такой же или большей, чем патогенных микроорганизмов, выводимых из организма теми же путями;

3)        не должны размножаться в окружающей среде;

4)        не должны сколько-нибудь значительно изменять свои биологические свойства при попадании в окружающую среду;

5)        должны быть достаточно типичными, с тем, чтобы их дифференциальная диагностика осуществлялась без особого труда;

6)        индикация, идентификация и количественный учет должны производиться современными, простыми, легко доступными и экономичными микробиологическими методами.

Находя в исследуемом материале представителей микрофлоры полости рта, делают заключение о попадании слизи из дыхательных путей, в которой могут содержаться и возбудители дифтерии, скарлатины, туберкулеза и пр. инфекционных болезней дыхательных путей. К сапрофитным микроорганизмам слизистых оболочек верхних дыхательных путей                        (являющихся                санитарно-показательными

микроорганизмами) относятся зеленящий стрептококк Streptococcus viridans, гемолитический стрептококк Streptococcus haemolyticus, в отдельных случаях стафилококк - Staphylococcus pyogenes (aureus).

Обнаруживая в объектах окружающей среды представителей микрофлоры кишечника, делают заключение о фекальном загрязнении и возможной опасности присутствия брюшнотифозных, дизентерийных палочек, сальмонелл и др.

возбудителей кишечных инфекций. Из постоянных обитателей кишечника в качестве санитарно-показательных микроорганизмов приняты следующие: БГКП (бактерии группы кишечных палочек), энтерококки (Enterococcus, Str.faecalis, Str.faecium), сульфитредуцирующие анаэробы преимущественно Clostridium perfringens, бактерии группы Proteus, кишечные бактериофаги. Причем, санитарно- показательное значение бактериофагов особенно возросло в последнее время в связи со вспышками вирусных заболеваний, а в некоторых странах фаговый тест является обязательным при санитарно-микробиологическом исследовании воды.
Владимир Заниздра

Основатель сайта Baker-Group.net. Более 25-ти лет опыта в кондитерском производстве. Более 20-ти лет опыта управления. Опыт в организации и проектирования производства с нуля. Сайт: baker-group.net/contacts.html Эл. почта Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

Оставить комментарий

Календарь

« Декабрь 2016 »
Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс
      1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11
12 13 14 15 16 17 18
19 20 21 22 23 24 25
26 27 28 29 30 31  

Рекомендуемые материалы