Тесты для идентификации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов

Тесты для идентификации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов

Стафилококки Морфологически Staphylococcus- грамположительные кокки, располагающиеся в виде характерных «виноградных гроздей». Патогенные стафилококки на кровяном агаре образуют колонии диаметром 2—3 мм, окруженные прозрачной зоной гемолиза; на молочно- или желточно-солевом агаре - колонии, окруженные зоной просветления (протеолитическая активность) и радужным венчиком (наличие фермента- лецитовителлазы).

Из подозрительных колоний делают высев на скошенный мясопептонный агар для выделения чистой культуры. После 24 ч инкубации при температуре 37°С проверяется плазмо коагулирующая активность культуры посевом в пробирки с 0,5 мл цитратной плазмы (человеческой или кроличьей) в разведении 1:4. Патогенные стафилококки коагулируют плазму в течение 2—24 ч в условиях термостата. Учет производят через 1, 2, 4 и затем 24 ч по образованию небольшого желеобразного сгустка на дне пробирки. Выделенные стафилококки подвергаются фаготипированию при необходимости установления источника возникновения стафилококковой инфекции и путей распространения.

Стрептококки Один из представителей - Str.viridans (зеленящий стрептококк) - постоянный непатогенный обитатель зева. На кровяном агаре Streptococcus образуют мелкие (точечные) сероватые колонии с прозрачной зоной гемолиза (Р~ гемолитические) и колонии с зеленовато-бурым ореолом и повышенной прозрачностью среды (а-зеленящие). На кровяном агаре нередко рост стрептококков подавляется быстрорастущей другой микрофлорой воздуха. Поэтому учет лучше вести на чашках с элективными средами - Гарро и Туржецкого, в которые для подавления сопутствующей флоры добавляется генциан фиолетовый, обладающий бактериостатическими свойствами в отношении сапрофитов воздуха. Культивирование проводят при 37°С. После подсчета выросших колоний из подозрительных на стрептококки делают мазки (стрептококки располагаются короткими цепочками или скоплениями) и затем пересевают на кровяной агар или в сахарный бульон. В бульоне стрептококки образуют цепочки, в чем необходимо убедиться с помощью микроскопии мазков, приготовленных из характерного придонного осадка (в виде хлопьев или крошек на дне пробирки при прозрачном бульоне).

Опытным путем установлена следующая зависимость: если в 2-х чашках после экспозиции в 20 мин развилось 2 колонии, то воздух считают чистым, если 3-4- слабо загрязненным. В классах после занятий исследователями улавливалось до 50000 клеток зеленящего стрептококка в 1м3.

Escherichia coli Колонии со среды Эндо пересевают в лактозный бульон с борной кислотой или в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым, предварительно нагретые до температуры 43-44°С (в водяной бане), и сразу после засева теплые пробирки помещают в термостат при температуре 43 °С на 24 ч. Борная кислота и бриллиантовый зеленый, добавляемые в среды, являются ингибиторами сопутствующей флоры. Появление газообразования свидетельствует о присутствии Е. coli в исследуемой воде. Если нет возможности сделать посев в лактозный бульон с борной кислотой, то идентификацию Е. coli проводят по двум признакам: ферментация лактозы при температуре 44,5°С в течение 24 ч и способности образовывать индол. В этом случае подозрительные на Е. coli колонии засевают параллельно в 2 пробирки: одну с полужидкой средой с лактозой, вторую - со средой для определения индола (бульон Хоттингера, пептонная вода или другая среда, содержащая триптофан), под пробку пробирки вставляют индикаторную бумажку на индол и инкубируют при температуре 44,5°С. Посевом в пробирки со средой ФКП-1 идентификация упрощается, так как в этой среде содержатся лактоза и триптофан. Положительный ответ дается при образовании газа (разложение лактозы) и индола (ферментация триптофана).

Тест Грегерсена Этим тестом можно заменить окраску по Граму. В капле 3%-ного водного раствора КОН на предметном стекле эмульгируют бактерийную массу, взятую с плотной среды. Спустя несколько секунд после перемешивания за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность исследуемой колонии к грамотрицательному виду. Грам(+) бактерии слизистые нити не образуют.

Каталазный тест Наносят 1-2 капли 3% перекиси водорода непосредственно на исследуемую колонию. Появление пузырьков свидетельствует о выделении бактериями каталазы.

Оксидазный тест Тест проводят с колониями микроорганизмов, выросшими на среде Эндо. Часть подозрительных колоний стерильной петлей переносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом: диметил-п-енилендиамином и а-нафтолом. Если микроорганизмы, выросшие на фильтре, выделяют оксидазу, цвет колонии через 2—5 мин изменяется на сине-фиолетовый. Такие колонии не учитывают при анализе воды. Можно на фильтровальную бумагу с индикатором накладывать весь фильтр с выросшими на нем колониями. Колонии БГКП темно- красного цвета не изменяют своей окраски (так как кишечные палочки оксидазоотрицательны) и учитываются как представители фекального загрязнения воды.

В сомнительных случаях - при наличии колоний розовых или бесцветных (лактозоотрицательных), не обладающих оксидазной активностью, дополнительно определяют способность бактерий ферментировать глюкозу при температуре 37° С и проявлять протеолитическую активность на среде Эндо с молоком. Колонии учитывают как БГКП, если они образованы грамоотрицательными палочками, ферментирующими глюкозу до кислоты и газа и не обладающими протеолитической активностью.

Список рекомендуемой литературы

1.    Мудрецова-Висс К.А., Кудряшова А.А., Дедюхина В.П. Микробиология, санитария и гигиена: учеб. для вузов. -7-е изд. - М.: ИД «Деловая литература», 2001. - 388 с.

2.    Санитарная микробиология / Н.В. Билетова, Р.П. Корнелаева, Л.Г. Кострикина и др. Под ред. С.Я. Любашенко. - М.:Пищ.пр-сть, 1980.-352 с.

3.    Мармузова Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. - М.: ИРПО, Академия, 2000. - 132 с.

4.    Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам: энциклопедический справочник. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Изд-во «Протектор», 2000. - 848 с.

5.    Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. А.А.Воробьева, Ю.С.Кривошеина. - М.: Мастерство, Высш.шк., 2001.-224 с.

6.    Санитарная микробиология и вирусология / З.Н. Кочемасова, С.А. Ефремова, A.M. Рыбакова - М.: Медицина, 1987. - 352 с.

7.    Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды: методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001. - 42 с.

8.    Определитель бактерий Берджи. В 2-х т.: Пер.с англ. / Под ред. Дж. Хоулта и др. - М.: Мир, 1997.

9.    Методы общей бактериологии: В 3-х т.- Пер. с англ. / Под ред. Ф. Герхардта и др. - М.: Мир, 1983.

Владимир Заниздра

Основатель сайта Baker-Group.net. Более 25-ти лет опыта в кондитерском производстве. Более 20-ти лет опыта управления. Опыт в организации и проектирования производства с нуля. Сайт: baker-group.net/contacts.html Эл. почта Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

Оставить комментарий

Календарь

« Декабрь 2016 »
Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс
      1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11
12 13 14 15 16 17 18
19 20 21 22 23 24 25
26 27 28 29 30 31  

Рекомендуемые материалы